層析柱的裝填好壞直接影響其分配效果

　　在蛋白質的分離純化過程中，離不開層析柱的使用，但層析柱的裝填好壞，直接影響其分配效果，進而影響產品的回收率及純度。
 

　　目前，國內外工業級層析柱的裝填方法主要為吸入式和置換式兩種。置換式在裝填小直徑層析柱時效果很好，但在層析柱直徑較大時(通常直徑在800mm以上)分配效果較差。因此廣泛采用的裝填方法為吸入式，即通過層析柱柱頭下壓至層析柱底部，將預先混勻的勻漿液通過活塞的方式吸入層析柱內。
 

　　層析柱是凝膠層析技術中的主體，一般用玻璃管或有機玻璃管。根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同，從而分離的一種層析法。柱層析技術又稱柱色譜技術，主要原理是根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同，經多次反復分配將組分分離開來。

 

　　柱層析操作時，先在圓柱管中先填充不溶性基質，形成一個固定相。將樣品加到柱子上，用特殊溶劑洗脫，溶劑組成流動相。在樣品從柱子上洗脫下來的過程中，根據樣品混合物中各組分在固定相和流動相中分配系數不同，經多次反復分配將組分分離。層析柱的直徑大小不影響分離度，樣品用量大，可加大柱的直徑，一般制備用凝膠柱，直徑大于2厘米，但在加樣時應將樣品均勻分布于凝膠柱床面上。
 

　　柱層析的上樣也有干法和濕法之分：干法就是把待分離的樣品用少量溶劑溶解后，在加入少量硅膠，拌勻后再旋去溶劑。如此得到的粉末再小心加到柱子的頂層。
 

　　干法上樣較麻煩，但可以保證樣品層很平整。濕法上樣就是用少量溶劑(最好就是展開劑，如果展開劑的溶解度不好，則可以用一極性較大的溶劑，但必須少量)將樣品溶解后，再用膠頭滴管轉移得到的溶液，沿著層析柱內壁均勻加入。然后用少量溶劑洗滌后，再加入。